ข่าว - การแนะนำเทคโนโลยีการสกัดกรดนิวคลีอิก

ⅠNกรดยูคลีอิกiบทนำ

กรดนิวคลีอิกแบ่งออกเป็นกรดดีออกซีไรโบนิวคลีอิก (DNA) และกรดไรโบนิวคลีอิก (RNA) โดยที่ RNA แบ่งออกเป็นไรโบโซมอล RNA (rRNA) เมสเซนเจอร์ RNA (mRNA) และถ่ายโอน RNA (tRNA) ตามหน้าที่ที่แตกต่างกันDNA ส่วนใหญ่กระจุกตัวอยู่ในนิวเคลียส ไมโตคอนเดรีย และคลอโรฟอร์ม ในขณะที่ RNA ส่วนใหญ่กระจายอยู่ในไซโตพลาสซึมเนื่องจากเป็นพื้นฐานที่สำคัญในการแสดงออกของยีน การสกัดกรดนิวคลีอิกจึงมีบทบาทสำคัญในการวิจัยทางชีววิทยาระดับโมเลกุลและการวินิจฉัยทางคลินิกระดับโมเลกุลความเข้มข้นและความบริสุทธิ์ของการสกัดกรดนิวคลีอิกจะส่งผลโดยตรงต่อ PCR ลำดับ การสร้างเวกเตอร์ การย่อยเอนไซม์ และการทดลองอื่นๆ ในภายหลัง

Ⅱ วิธีการสกัดกรดนิวคลีอิกและการทำให้บริสุทธิ์

1 วิธีการสกัดฟีนอล/คลอโรฟอร์ม

การสกัดฟีนอล/คลอโรฟอร์มเป็นวิธีการดั้งเดิมสำหรับการสกัด DNA ซึ่งส่วนใหญ่ใช้ตัวทำละลายอินทรีย์ที่แตกต่างกันสองตัวในการบำบัดตัวอย่าง การละลายกรดนิวคลีอิกที่มี DNA เป็นหลักในระยะน้ำ ไขมันในระยะอินทรีย์ และโปรตีนระหว่างสองระยะวิธีนี้มีข้อดีคือต้นทุนต่ำ มีความบริสุทธิ์สูง และให้ผลดีข้อเสียคือการดำเนินการซับซ้อนและใช้เวลานาน

② วิธีไตรโซล

วิธี Trizol เป็นวิธีการคลาสสิกสำหรับการสกัด RNAวิธี Trizol แบ่งออกเป็นเฟสที่เป็นน้ำและเฟสอินทรีย์หลังจากการปั่นแยกด้วยคลอโรฟอร์ม ซึ่ง RNA จะถูกละลายในเฟสที่เป็นน้ำ เฟสที่เป็นน้ำจะถูกถ่ายโอนไปยังหลอด EP ใหม่ การตกตะกอนจะเกิดขึ้นหลังจากเติมไอโซโพรพานอล จากนั้นจึงทำให้เอธานอลบริสุทธิ์วิธีนี้เหมาะสำหรับการสกัด RNA จากเนื้อเยื่อ เซลล์ และแบคทีเรียของสัตว์

3 วิธีการทำให้บริสุทธิ์คอลัมน์แบบแรงเหวี่ยง

วิธีการทำให้บริสุทธิ์คอลัมน์หมุนเหวี่ยงสามารถดูดซับ DNA โดยเฉพาะผ่านวัสดุดูดซับเมทริกซ์ซิลิกอนพิเศษ ในขณะที่ RNA และโปรตีนสามารถผ่านได้อย่างราบรื่น จากนั้นใช้เกลือสูง pH ต่ำเพื่อรวมกรดนิวคลีอิก เกลือต่ำค่า PH สูงเพื่อแยกและทำให้กรดนิวคลีอิกบริสุทธิ์ข้อดีคือมีความเข้มข้นในการทำให้บริสุทธิ์สูง มีความเสถียรสูง ไม่จำเป็นต้องใช้ตัวทำละลายอินทรีย์ และต้นทุนต่ำข้อเสียคือต้องปั่นแยกทีละขั้นตอน ขั้นตอนการทำงานมากขึ้น

④ วิธีลูกปัดแม่เหล็ก

วิธีเม็ดบีดแม่เหล็กคือการแยกตัวอย่างเนื้อเยื่อเซลล์ผ่านไลซีน ปล่อยกรดนิวคลีอิกในตัวอย่าง จากนั้นโมเลกุลของกรดนิวคลีอิกจะถูกดูดซับเป็นพิเศษบนพื้นผิวของเม็ดบีดแม่เหล็ก ในขณะที่สิ่งเจือปน เช่น โปรตีนและน้ำตาล จะถูกทิ้งไว้ ของเหลวผ่านขั้นตอนของการแยกเนื้อเยื่อเซลล์, เม็ดแม่เหล็กจับกับกรดนิวคลีอิก, การล้างกรดนิวคลีอิก, การชะกรดนิวคลีอิก ฯลฯ ในที่สุดก็ได้กรดนิวคลีอิกบริสุทธิ์ข้อดีคือใช้งานง่ายและใช้เวลาสั้น โดยไม่จำเป็นต้องปั่นแยกเป็นขั้นตอนมีข้อกำหนดทางเทคนิคต่ำและสามารถใช้งานแบบอัตโนมัติและแบบจำนวนมากได้การผสมผสานเฉพาะของเม็ดแม่เหล็กและกรดนิวคลีอิกทำให้กรดนิวคลีอิกที่สกัดออกมามีความเข้มข้นและความบริสุทธิ์สูงข้อเสียคือราคาตลาดปัจจุบันค่อนข้างแพง

⑤ วิธีการอื่นๆ

นอกเหนือจากสี่วิธีข้างต้นแล้ว ยังมีการแตกร้าวแบบเดือด วิธีเกลือเข้มข้น วิธีผงซักฟอกแบบประจุลบ วิธีอัลตราโซนิก และวิธีเอนไซม์ เป็นต้น

Ⅲ ประเภทของการสกัดกรดนิวคลีอิก

Foregene มีแพลตฟอร์ม Direct PCR ชั้นนำของโลก ซึ่งเป็นแพลตฟอร์มแยก RNA แบบสองคอลัมน์ (เฉพาะ DNA + RNA เท่านั้น)ผลิตภัณฑ์หลัก ได้แก่ ชุดแยก DNA/RNA, ชุดรีเอเจนต์ PCR และ Direct PCR รีเอเจนต์ในห้องปฏิบัติการระดับโมเลกุล

1 การสกัด RNA ทั้งหมด

ตัวอย่างการสกัด RNA ทั้งหมด ได้แก่ เลือด เซลล์ เนื้อเยื่อสัตว์ พืช ไวรัส ฯลฯ สามารถรับ RNA ทั้งหมดที่มีความบริสุทธิ์สูงและความเข้มข้นสูงได้ผ่านการสกัด RNA ทั้งหมด ซึ่งสามารถใช้ใน RT-PCR, การวิเคราะห์ชิป, การแปลในหลอดทดลอง, การโคลนระดับโมเลกุล Dot Blot และการทดลองอื่นๆ

เรื่องที่เกี่ยวข้องกับ Forgeneชุดแยก RNA

ชุดแยก RNA ทั้งหมดของสัตว์--สกัด RNA ทั้งหมดที่มีความบริสุทธิ์สูงและคุณภาพสูงจากเนื้อเยื่อสัตว์ต่างๆ ได้อย่างรวดเร็วและมีประสิทธิภาพ

ชุดแยก RNA ของเซลล์ทั้งหมด--RNA ทั้งหมดที่มีความบริสุทธิ์สูงและมีคุณภาพสูงสามารถรับได้จากเซลล์เพาะเลี้ยงต่างๆ ภายใน 11 นาที

ชุดแยก RNA โดยรวมของพืช--สกัด RNA ทั้งหมดคุณภาพสูงอย่างรวดเร็วจากตัวอย่างพืชที่มีปริมาณโพลีแซ็กคาไรด์และโพลีฟีนอลต่ำ

ชุดแยก RNA ของไวรัส--แยกและทำให้ RNA ของไวรัสบริสุทธิ์ได้อย่างรวดเร็วจากตัวอย่าง เช่น พลาสมา เซรั่ม ของเหลวในร่างกายที่ปราศจากเซลล์ และส่วนลอยเหนือตะกอนของการเพาะเลี้ยงเซลล์

2 การสกัดดีเอ็นเอจีโนม

ตัวอย่างการสกัด DNA ของจีโนม ได้แก่ ดิน อุจจาระ เลือด เซลล์ เนื้อเยื่อสัตว์ พืช ไวรัส ฯลฯ การสกัด DNA ของจีโนมสามารถใช้ในการย่อยเอนไซม์ การสร้างคลัง DNA PCR การเตรียมแอนติบอดี การวิเคราะห์ลูกผสมเวสเทิร์นบล็อต ชิปยีน สูง -การจัดลำดับปริมาณงานและการทดลองอื่นๆ

เรื่องที่เกี่ยวข้องกับ Forgeneชุดแยกดีเอ็นเอ

ชุดแยก DNA เนื้อเยื่อสัตว์--การสกัดและการทำให้บริสุทธิ์ของ DNA จีโนมอย่างรวดเร็วจากหลายแหล่ง เช่น เนื้อเยื่อของสัตว์ เซลล์ ฯลฯ

ชุด Blood DNA Midi (1-5 มล.)--ชำระล้าง DNA จีโนมคุณภาพสูงได้อย่างรวดเร็วจากเลือดที่แข็งตัว (1-5 มล.)

ชุดแยกดีเอ็นเอของบัตร FTA/Buccal Swab--ทำให้ DNA จีโนมคุณภาพสูงบริสุทธิ์ได้อย่างรวดเร็วจากตัวอย่างไม้กวาดแก้ม/บัตร FTA

ชุดแยก DNA พืช--ทำให้บริสุทธิ์อย่างรวดเร็วและได้รับ DNA จีโนมคุณภาพสูงจากตัวอย่างพืช (รวมถึงตัวอย่างพืชโพลีแซ็กคาไรด์และโพลีฟีนอล)

3 การสกัดพลาสมิด

พลาสมิดเป็น DNA โมเลกุลขนาดเล็กทรงกลมชนิดหนึ่งในเซลล์ ซึ่งเป็นพาหะทั่วไปสำหรับการรวมตัวกันของ DNAวิธีการสกัดพลาสมิดคือการกำจัด RNA แยกพลาสมิดออกจาก DNA จีโนมของแบคทีเรีย และกำจัดโปรตีนและสิ่งสกปรกอื่น ๆ เพื่อให้ได้พลาสมิดที่ค่อนข้างบริสุทธิ์

ชุดพลาสมิดมินิทั่วไป--ทำให้พลาสมิด DNA คุณภาพสูงบริสุทธิ์ได้อย่างรวดเร็วจากแบคทีเรียที่ถูกเปลี่ยนรูปสำหรับการทดลองทางอณูชีววิทยาตามปกติ เช่น การเปลี่ยนแปลงและการย่อยของเอนไซม์

④ การสกัดประเภทอื่นๆ การสกัด miRNA ฯลฯ